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一代测序和二代测序的区别?

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一代测序和二代测序的区别?

二代测序相比一代测序大幅降低了成本,保持了较高准确性,并且大幅降低了测序时间,将一个人类基因组从3年降为1周以内,但在序列读长方面比起第一代测序技术则要短很多,这也给三代测序提供了发展空间。

一代测序:又称Sanger测序

原理:ddNTP的2'和3'都不含羟基,其在DNA的合成过程中不能形成磷酸二酯键,可以用来中断DNA合成反应。在4个DNA合成反应体系(含dNTP)中分别加入一定比例带有标记的ddNTP(分别为ddATP、ddCTP、ddGTP和ddTTP),通过凝胶电泳和放射自显影后可以根据电泳带的位置确定待测分子的DNA序列。

二代测序:NGS技术(多分子,多克隆)

背景:Sanger测序虽读长较长、准确性高,但由于其测序成本高、通量低等缺点,难以在de novo测序、转录组测序等方面普及应用。经过不断的技术开发和改进,以Roche公司的454技术、illumina公司的Solexa、Hiseq技术,ABI公司的Solid技术为标志的第二代测序技术诞生,后起之秀Thermo Fisher的Ion Torrent技术近年来也杀入历史舞台。

1、Illumina 原理:

桥式PCR+4色荧光可逆终止+激光扫描成像

主要步骤:

①DNA文库制备—超声打断加接头

②Flowcell—吸附流动DNA片段

③桥式PCR扩增与变性—放大信号

④测序—测序碱基转化为光学信号

特点:Illumina的这种测序技术每次只添加一个dNTP的特点能够很好的地解决同聚物长度的准确测量问题,它的主要测序错误来源是碱基的替换。而读长短(200bp-500bp)也让其应用有所局限。

2、Roche 454

油包水PCR + 4种dNTP车轮大战 + 检测焦磷酸水解发光

一代又一代的人英语怎么说?

一代又一代的人Generation after generation教师是辛勤的园丁,培养了一代又一代的人,让它们成为有用的人才。Teachers are the hard-working gardeners who cultivate students generation by generation to make them become the talents.

试管一代二代三代分别需要多少钱?

做手术的事情需要认真考虑的,所需要考虑的地方相当多,其实现在的做手术之类的都是要根据自身的情况而有需要的费用的,一般来说需要一代、二代试管婴儿的费用大约为3万左右,而三代试管婴儿的费用5~10万。具体的根据不同医院给出的价格而定的。

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